精品三级久久,精品一区二区三区在线播放,精品少妇精品久久久,日日影院

文章詳情

小鼠脾臟CD8+T細胞的磁珠分選

日期:2024-07-04 09:20
瀏覽次數:21
摘要:上海達為科生物科技有限公司,位于上海長(cháng)江軟件園,公司目前具備較好的生物學(xué)、醫學(xué)技術(shù)服務(wù)平臺,能夠為廣大客戶(hù)提供醫學(xué)科研樣本檢測、合作研究、開(kāi)發(fā)及生產(chǎn)服務(wù)。?我們擁有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗室、先進(jìn)的實(shí)驗設備和經(jīng)驗豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團隊包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,致力于動(dòng)物模型、動(dòng)物實(shí)驗、動(dòng)物實(shí)驗外包、整體實(shí)驗外包,細胞實(shí)驗、細胞實(shí)驗外包、整體畢業(yè)課題等等。

一、制備脾臟單細胞懸液

8周齡C57BL/6小鼠摘眼球放血,無(wú)菌分離脾臟,于70um濾網(wǎng)上研磨收集脾細胞,過(guò)濾、離心,再以RPMI-1640完全培養液重懸。

二、磁珠標記

1. 細胞計數為8×107/mL。

2. 400×g離心4分鐘,去除上清。

3.每107個(gè)細胞總量使用40μL緩沖液重懸。

4.每107個(gè)細胞總量添加10μL CD8+T細胞生物素抗體混合物。

5.混勻,4℃孵育 5分鐘。

6.每107個(gè)細胞加入2mL緩沖液洗滌細胞,400×g離心4分鐘,去上清。

7.每107個(gè)細胞添加80μL 緩沖液。

8.每107個(gè)細胞添加20μL抗生物素磁珠。

9.混勻,4℃孵育 10分鐘。

三、磁珠細胞分選  

1. 將LS分選柱置于相對應的分選器中。

2. 用適當體積的緩沖液潤洗分選柱.

3. 將細胞懸液轉移至分選柱中,收集含有未標記細胞的流出液,即 CD8+T細胞。

4. 加適量的緩沖液,收集總流出物,并與步驟3中的流出液混合,這CD8+T細胞。

四、流式鑒定

1. 將磁珠分選后得到的CD8+T細胞懸液離心,400 ×g,4min,棄去上清。

2. 細胞沉淀中加入1 mL完全培養基,計數。

3. 從中取出兩份細胞(一份大概1×106個(gè)細胞),設置為blankCD8+T染色組。

4. CD8+T染色組加入200 μL流式染色緩沖液,再加入5 μL Anti-Mo CD8a,吹打均勻,常溫避光孵育15min;

5. 孵育結束后,PBS洗滌細胞,離心去上清;

6. 加入200 μL流式染色緩沖液,上機檢測。

滬公網(wǎng)安備 31011302004470號

米易县| 闵行区| 高雄县| 两当县| 姚安县| 高安市| 芜湖市| 庐江县| 岳普湖县| 台前县| 南部县| 清原| 昌邑市| 芮城县| 舟山市| 恩施市| 岢岚县| 盐边县| 崇明县| 呈贡县| 呼玛县| 盐边县| 香港| 奎屯市| 江陵县| 安泽县| 九龙城区| 英吉沙县| 来宾市| 玉龙| 平陆县| 桃源县| 武宁县| 阳高县| 周至县| 滕州市| 晋中市| 峨眉山市| 武山县| 浦北县| 海安县|